小分子RNA冲击技术是一种免疫地阻断某些等位基因隐含的分析手段,在、感染传染,遗传病及其它性疾病的放射治疗里面均有广泛应用。太快感染核酸是一类叫做重一组逆转录感染的核酸,由于具有可以传染非内部矛盾期与内部矛盾期巨噬细胞,能容大的外源性最终目标 等位基因片段,免疫反应小等特点,现已成为移转到最终目标 等位基因踏入哺乳动物巨噬细胞的全然核酸。将太快感染核酸用到RNA冲击当里面,可以免疫抑制哺乳动物的各类巨噬细胞里面等位基因的隐含,成为等位基因功能分析和等位基因放射治疗的有力手段。以外分析表明太快感染核酸能在哺乳动物各类巨噬细胞保持稳定隐含siRNA,长期以来抑制等位基因隐含。为构建巨噬细胞模型先前等位基因放射治疗提供有效率的分析手段。
生博以外为卖家选取过几百种等位基因的冲击早先,并通过太快感染得到几十种保持稳定巨噬细胞株。为先前分析等位基因放射治疗提供了有效率依据。
BXXX1等位基因冲击保持稳定HeLa巨噬细胞株借助于
第一大部分:BXXX1冲击核酸借助于(核酸pMagic 4.1)
siRNA设计:
MarkergeneGene IDTargetSeqGC%KD1BXXX1NM_XXX4 GCCXXXXXXXXXXXXXGA47.4 KD2BXXX1NM_XXX4GGTXXXXXXXXXXXXXTAT52.6KD3BXXX1NM_XXX4CCAXXXXXXXXXXXXXTTT52.6KD4 BXXX1NM_XXX4GCAXXXXXXXXXXXXXGAA47.4pLVT4NC TTCTCCGAACGTGTCACGT 52.6第二大部分QPCR筛靶科学研究
Real-time PCR检测结果显示: HeLa巨噬细胞里面,相对NC一组, 四个靶标里面,KD2,KD4对最终目标等位基因BXXX1的隐含的敲增效率翻倍80%以上,KD3对最终目标等位基因BXXX1的隐含的敲增效率也翻倍50%以上,都是有效率靶标。
第三大部分Western blot内源验证科学研究报告
Western Blot检测结果
探针说明:
M 为Marker;
1 CON为短时间最终目标空巨噬细胞(HeLa)探针;
2 NC为短时间最终目标巨噬细胞(HeLa),加阴性对照感染传染的巨噬细胞探针(Negative Control);
3 KD为短时间最终目标巨噬细胞(HeLa),加RNAi靶标感染传染的巨噬细胞探针(Knock Down)
从Western Blot结果可以看出,KD1,KD2靶标对HeLa巨噬细胞BXXX1的隐含有敲增效果,为有效率靶标。
第四大部分:冲击太快感染KD1.、对照太快感染CMV-GFP-L.V.传染HeLa巨噬细胞株后选取保持稳定株。
HeLa 白光一组 White light荧光一组 Fluoresce 混和度 Day 3, 100× BlankKD1 MOI 10KD1 MOI 20CMV-GFP MOI 10CMV-GFP MOI 20三、科学研究概括:
1、HeLa巨噬细胞传染KD1.太快感染,MOI 10、MOI 20时致癌性大,死巨噬细胞多。若只计活巨噬细胞,传染效率高,都超过80%。
2、HeLa巨噬细胞传染CMV-GFP-L.V.太快感染,MOI 10、MOI 20时传染效率高,都超过90%。
3、传代培养后,最终选取出HeLa- KD1 MOI 10保持稳定株,HeLa- KD1 MOI 20保持稳定株、HeLa- CMV-GFP MOI 20保持稳定株。
编辑: 郑相关新闻
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